Su padre muere el año 1931, por una enfermedad, y su infancia tremendamente solitaria influenció su carácter, inclinado a la introspección y a la creatividad. Estudia Literatura en la Universidad de Florencia, y se titula con una tesis sobre la poesía de Ungaretti.

En 1946 publica su primer libro de poesía "La sabbia e l'angelo", que nace de la experiencia de la guerra, y se caracteriza por un sentido omnipresente de la muerte.

Traduce poetas y escritores de lengua inglesa, como John Donne, Emily Dickinson, Mark Twain, Oscar Wilde, Henry James, Joseph Conrad, Ezra Pound, T.S. Eliot, Elizabeth Bishop, etc.

• La sabbia e l'angelo, Firenze, Vallecchi, 1946
• Epitaffi, Firenze, Vallecchi, 1946
• Morte del ricco. Un oratorio, Firenze, Vallecchi, 1954
• Giorno dei Santi, Milano, All'insegna del pesce d'oro, 1957
• Paglia e polvere, Cittadella veneta, Rebellato, 1961
• Poesie, Milano, Rizzoli, 1965
• Neurosuite, Vicenza, Neri Pozza, 1970
• Terra senza orologi, Milano, Trentadue, 1973
• Studi su Eliot, Milano, Istituto Propaganda Libreria, 1975
• Taccuino slavo, Vicenza, La Lacusta, 1976
• Il vuoto e le forme, Padova, Rebellato, 1977
• Studi su poeti e narratori americani, Cagliari, EDES, 1978
• L'altare di Isenheim, Milano, Rusconi, 1980
• L’orologio di Bologna, Firenze, Città di vita, 1981
• Storie di San Benedetto, tratte da uno scritto di San Gregorio Magno e dalla Regola di San Benedetto, riflesioni di M. Guidacci per i bambini, Torino, Marietti, 1981
• Inno alla gioia, Firenze, Centro internazionale del libro, 1983
• La Via Crucis dell’Umanità, 15 bassorilievi in bronzo di L. Rosito, commento poetico di Margherita Guidacci, Firenze, Città di vita, 1984
• La sabbia e l’angelo, Parigi, Obsidiane, 1986
• Una breve misura, s.l., Vecchio Faggio Editore, 1988
• Il buio e lo splendore, Milano, Garzanti, 1989
• Anelli nel tempo, Firenze, Città di vita, 1993
• Le poesie, a cura di M. Del Serra, Firenze, Le Lettere, 1999
• Il fuoco e la rosa : Quattro quartetti di Eliot e Studi su Eliot, a cura di Ilaria Rabatti, Pistoia, Petite plaisance, 2006