Little fue miembro de The Groundlings, una compañía de comedia de improvisación y sketches con sede en Los Ángeles. El veterano animador Joe Murray se encontró con Little y le preguntó si estaba interesado en ser actor de voz y decidió que Little encajaba con los personajes Chip y Skip en Camp Lazlo.^[1]​

Después de un período trabajando como escritor y actor, protagonizó la película de Todd Rohal de 2011, The Catechism Cataclysm. Little además escribió y protagonizó un piloto de Nickelodeon llamado Cosmic Signals. También ha prestado su voz a personajes como Dr. Barber y Lolly Poopdeck en Las maravillosas desventuras de Flapjack, así como a The Duke of Nuts, Turtle Princess, Abracadaniel y Peppermint Butler en la serie de Cartoon Network Adventure Time.

Little interpretó al personaje recurrente Stevie Janowski, un profesor de banda de secundaria que idolatraba y servía como asistente personal del personaje principal, Kenny Powers, en la serie de HBO Eastbound & Down.^[2]​ No conocía a Danny McBride ni a los showrunners antes de la audición para el papel, pero el ambiente familiar era muy acogedor. Tras ser elegido, Little basó algunos gestos y emociones de Stevie en personas con las que fue al instituto.^[3]​

Después de Eastbound & Down, apareció en series como 30 Rock y The Office, y Romantic Encounters.^[4]​^[5]​

Little coprotagonizó dos de las películas surrealistas de Quentin Dupieux, Wrong y Wrong Cops. En 2014, protagonizó el cortometraje Rat Pack Rat, que ganó el premio del jurado en el Festival de Cine de Sundance de 2014.^[6]​ En 2015, interpretó a Cleve Menu en el programa de Adult Swim Neon Joe, Werewolf Hunter.

De 2016 a 2017, actuó en la serie de Netflix Haters Back Off como el tío de Miranda Sings, Jim, junto a Colleen Ballinger y Angela Kinsey.^[7]​ Durante ese mismo año interpretó al personaje de George en la película de comedia de terror Another Evil.

• Steve Little en Internet Movie Database (en inglés).