Hijo de John Seymour (c.1450-1491) y de Elizabeth Darrell, tenía como abuelos paternos a John Seymour, Alguacil de Wiltshire y a Elizabeth Croker. Sus abuelos maternos eran Sir George Darrell y Margaret Stourton, hija de John de Stourton de Stourton, y Margery Wadham.

John se casó con Margery Wentworth en Savernake Forest, Wiltshire, quien poseía una belleza celebrada en una composición de John Skelton.

Tuvieron nueve hijos:

• John (? - 1510);
• Edward (c. 1500 - 1552), Primer Duque de Somerset, y Lord Protector de Inglaterra desde 1547 hasta 1549;
• Thomas (c. 1508 - 1549), Primer Barón Sudeley;
• Juana (c. 1509 - 1537), Reina de Inglaterra, tercera esposa de Enrique VIII, madre de Eduardo VI de Inglaterra;
• Elizabeth (c. 1513 - 1563), marquesa de Winchester, que se casó con Gregorio Cromwell, 1.er Barón Cromwell, hijo del ministro de Enrique VIII ejecutado;
• Henry (c. 1514 - c. 1568);
• Dorothy;
• Anthony;
• Margery;

Seymour falleció el 21 de diciembre de 1536 mientras su hija era Reina de Inglaterra y antes del nacimiento de su nieto, el futuro Eduardo VI de Inglaterra. Por costumbre real, su hija no asistió a sus funerales.

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