Originario de Werkendam, localidad situada en el norte de la provincia neerlandesa de Brabante Septentrional, entró en la Universidad Técnica de Delft, donde se licenció como ingeniero civil. Durante la década de 1920 militó en varias organizaciones de extrema derecha que reclamaban la unión de la región belga de Flandes con los Países Bajos. En 1931 fue uno de los fundadores del NSB (Nationaal-Socialistische Beweging in Nederland, Movimiento Nacional-Socialista de los Países Bajos), de inspiración fascista y posteriormente nazi. Personaje y político carismático, desde el principio se convirtió en el líder del NSB y uno de los políticos neerlandeses más conocidos de la década de 1930. En los años anteriores a la Segunda Guerra Mundial empezó a simpatizar y defender la colaboración con la Alemania nazi, y ya en noviembre de 1936 mantuvo un encuentro con Adolf Hitler.

Tras la invasión alemana de los Países Bajos en mayo de 1940, Mussert propugna la alianza con los alemanes y la abolición de la monarquía neerlandesa. En ese momento, Mussert esperaba que las nuevas autoridades alemanas le pusieran a la cabeza de un Estado neerlandés independiente, pero la administración del país es asumida por el dirigente nazi austríaco Arthur Seyss-Inquart, quien purga a la burocracia del país de potenciales opositores al nazismo e instala el aparato de represión política nazi en los Países Bajos, colocando a funcionarios alemanes en los puestos claves de la administración pública y negando - en los hechos - cualquier oportunidad de constituir un "gobierno títere" neerlandés nativo.

Seyss-Inquart, no obstante, no prescindirá de Mussert y contará con él para que los militantes del NSB actúen como una fuerza local de apoyo a los ocupantes alemanes. Así, en 1941, el NSB es el único partido neerlandés autorizado por el ocupante y colabora abiertamente en las administraciones alemanas civiles y locales: sus efectivos alcanzan entonces los 100.000 miembros. Por ello, al ser Mussert el líder del único partido permitido, le convierte en el personaje principal de la política neerlandesa, trabajando activamente para beneficiar el esfuerzo bélico nazi y forzar a sus compatriotas a hacer lo propio.

En septiembre de 1940, pocos meses después de la invasión alemana, Mussert encarga a un miembro del NSB, Henk Feldmeijer, la misión de formar una unidad de SS holandeses (Nederlandsche SS) en apoyo de los nazis. No será la única acción pro-nazi de Mussert, si bien cuando se produjo el Ataque alemán a la Unión Soviética junto con el NSB formuló un llamamiento de voluntarios para acudir al Frente Oriental en socorro de la Wehrmacht, mientras que las milicias del NSB apoyaban a la Gestapo en la persecución contra la Resistencia holandesa y la numerosa comunidad judía del país. Más avanzada la guerra, llegarían a formarse divisiones alemanas compuestas por nazis neerlandeses, como la 34.ª División de Granaderos SS Landstorm Nederland.^[1]​ El 13 de diciembre de 1942 Mussert fue nombrado al fin "Leider" (líder) del Pueblo Holandés por los alemanes, aunque su poder político en la realidad era bastante reducido.^[2]​

El 7 de mayo de 1945, después de la rendición alemana, Mussert fue detenido por las nuevas autoridades neerlandesas bajo la acusación de traición por su colaboración con el ocupante nazi. Sus anteriores políticas y apoyo al poder nazi se le volvieron en contra, y finalmente fue procesado y condenado a muerte. Sería fusilado el 7 de mayo de 1946 en la ciudad de La Haya.